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    兽残
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    超高效液相色谱-串联质谱法测定禽蛋中2种色素残留
    超高效液相色谱-串联质谱法测定禽蛋中2种色素残留
    作者:杨梅,张姮婕,陈红
    ( 成都市食品药品检验研究院,四川成都610045)
    1方法
    1.1加丽素红、加丽素黄含量测定
    按照GB/T18970—2003《饲料添加剂10%β,β-胡萝卜素-4,4-二酮(10%斑蝥黄)》及GB/T21516—2008《饲料添加剂10%β-阿朴-8’-胡萝卜素酸乙酯(粉剂)》方法,测定购买的加丽素红、加丽素黄中斑蝥黄和β-阿朴-8’-胡萝卜素酸乙酯的含量。
    1.2对照溶液的配制
    斑蝥黄对照储备液配制:精密称取斑蝥黄对照品0.01g,加入0.1g BHT,用甲醇-三氯甲烷(9∶1,V/V)溶解并定容至100ml,浓度为100μg/ml,-20℃保存。
    斑蝥黄对照系列溶液配制:临用时,取配制的斑蝥黄对照储备液,用含0.1%甲酸的乙腈稀释制成5、20、50、100、200、1000ng/ml的系列溶液。
    混合工作对照储备液配制:临用新制。精密称取加丽素红、加丽素黄各0.01g置25ml容量瓶中,加入0.1g BHT,加1ml 60℃水,超声5min后,加15ml甲醇与2ml三氯甲烷,继续超声5min,用甲醇稀释至刻度,摇匀,过0.22μm尼龙微孔滤膜,取续滤液即得。斑蝥黄和β-阿朴-8’-胡萝卜素酸乙酯的浓度均为40μg/ml。
    混合系列工作对照溶液配制:临用时,取配制的混合工作对照储备液,用含0.1%甲酸的乙腈稀释制成含斑蝥黄和β-阿朴-8’-胡萝卜素酸乙酯分别为5、20、50、100、200、1000ng/ml的系列溶液。
    1.3样品前处理
    禽蛋去壳后均质,取1.0g样品于50ml离心管中,加入0.1g BHT和1ml丙酮,涡旋30s,加入20ml乙腈,涡旋1min,超声(250W,53kHz) 30min,10000r/min离心5min,取上清液,加10ml乙腈饱和的正己烷涡旋1min,静置分层后弃去上层正己烷层,下层溶液用5g无水硫酸钠脱水后于40℃减压蒸干。取Silica固相萃取柱(200mg,3ml),用3ml正己烷-丙酮(9∶1,V/V)活化,残渣加2ml正己烷使溶解后将其转至Silica固相萃取柱顶部,收集流出液,用6ml正己烷-丙酮(9∶1,V/V)洗脱,合并流出液,于40℃下氮气吹至近干。用1ml含0.1%甲酸的乙腈溶解残渣,过0.22μm尼龙微孔滤膜,滤液待分析。如样品溶液中目标物含量过高(超出标准曲线范围),应酌情稀释。
    1.4仪器条件

    色谱条件:色谱柱:WatersACQUITYUPLCBEHC18色谱柱(2.1mm×50mm,1.7μm);柱温40℃;进样量1μl;流速0.3ml/min;流动相A为0.1%甲酸,流动相B为含0.1%甲酸的乙腈,梯度洗脱条件见表1。在上述色谱条件下,斑蝥黄反式、顺式异构体保留时间分别为1.52、1.72min,β-阿朴-8’-胡萝卜素酸乙酯保留时间为2.28min。斑蝥黄的量以顺、反式异构体总量计。


    质谱条件:离子源及扫描方式:电喷雾离子源(ESI),正离子模式,多反应监测(MRM);电离电压3.5kV;离子源温度150℃;脱溶剂气温度500℃;脱溶剂气流量550L/h(氮气);锥孔反吹气流量50L/h(氮气);碰撞室压力4.01×10-3mbar(碰撞气为氩气);离子条件见表2。
     

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